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本试剂盒可测动物全血、血清(浆)、组织等样本中丁酰胆碱酯酶的活力。


丁酰胆碱酯酶水解丁酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可以反应胆碱酯酶的活力。


丁酰胆碱脂酶又拟称胆碱酯酶、假性胆碱酯酶和血清胆碱酯酶。它是由肝脏细胞合成分泌进入血液的，主要分布在肝脏、血清和淋巴液中。丁酰胆碱脂酶蛋白为四聚体，四个亚基的结构完全一样，各包括574个氨基酸，每个亚基还结合9条糖链，占亚基相对分子质量的23.9%。丁酰胆碱脂酶属于B酯酶，在有机磷的解毒中发挥了重要作用，通过和有机磷结合，减少了血中可和丁酰胆碱脂酶结合的游离的有机磷，从而减轻丁酰胆碱堆积造成的中毒症状，起到了间接的解毒作用。

• 灵敏度高，微量样品即可测出丁酰胆碱酯酶的水平。
  
• 方法简单快速，准确稳定。
  
• 不需要气相色谱等昂贵仪器，只要一般分光光度计即可。
  
• 可以分型，另有配套试剂盒可测乙酰胆碱酯酶。

组分	规格	保存
试剂一：标准品粉剂	3支	4℃
试剂二：底物粉剂	2支	4℃
试剂三：显色剂贮备液	3mL	4℃
试剂四：抑制剂*	1支	RT
试剂五：透明剂	6mL	RT
生理盐水	2×60mL	RT

注^*：试剂四打开后可以装在附赠的小塑料空瓶内。
保存：2～8℃，有效期3个月。

• 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为412nm）
  
• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为37℃）
  
• 漩涡混匀器
  
• 微量移液器

• 1μmol/mL标准品应用液：取标准品粉剂一支加生理盐水10mL混匀，现用现配。
  
• 底物缓冲液：用时每支底物粉剂加生理盐水20mL，现用现配，配好后4℃可保存两周。
  
• 显色剂应用液：用时以生理盐水按1:9稀释。用多少配多少，也可以一次配成30mL，避光冷藏，3个月内用完。

• 组织样本：
  准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清，即为10%匀浆上清液。参考取样量为30～50μL。
  
• 血清样本：
  取抗凝全血1000～2500转/分钟，离心10分钟，取上层血浆。也可测血清，测时将血清(浆)用生理盐水1:19稀释。参考取样量为30～50μL。
  
• 全血样本：
  取0.1mL抗凝全血加生理盐水至10mL（即按1:99稀释），取x mL(一般取0.1mL)检测，每个样本取样前必须充分混匀。

按下表加入各成分，并进行相应操作。

成分	空白管	标准管	测定管	对照管
样本(mL)			x
1μmol/mL标准品应用液(mL)		x
双蒸水(mL)	x
底物缓冲液(mL)	0.5	0.5	0.5	0.5
显色剂应用液(mL)	0.5	0.5	0.5	0.5
混匀，37℃准确反应6分钟。
抑制剂(mL)	0.03	0.03	0.03	0.03
透明剂(mL)	0.1	0.1	0.1	0.1
样本(mL)				x
混匀，静置15分钟，波长412nm，0.5cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

• 组织匀浆中丁酰胆碱酯酶的计算：
  定义：每毫克组织蛋白样本在37℃保温6分钟，水解反应体系中1μmol基质为1单位。
  

  B-CHE活力 (U/mgprot)	＝	测定OD值－对照OD值	×	标准品浓度 (1μmol/mL)	÷	待测样本蛋白浓度 (mgprot/mL)
  		标准OD值－空白OD值

  
  
• 血清中丁酰胆碱酯酶的计算：
  定义：每毫升血清样本在37℃保温6分钟，水解反应体系中1μmol基质为1单位。
  

  B-CHE活力 (U/mL)	＝	测定OD值－对照OD值	×	标准品浓度 (1μmol/mL)	×	样本测试前稀释倍数
  		标准OD值－空白OD值

  
  
• 全血中丁酰胆碱酯酶的计算：
  定义：每毫升全血在37℃保温6分钟，水解反应体系中1μmol基质为1单位。
  

  B-CHE活力 (U/mL)	＝	测定OD值－对照OD值	×	标准品浓度 (1μmol/mL)	×	样本测试前稀释倍数
  		标准OD值－空白OD值

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